Produk

Protein ORF45 dari Sarcoma-Associated Herpesvirus (KSHV) Kaposi adalah protein tegument segera-awal khusus gammaherpesvirus.Studi kami sebelumnya telah mengungkapkan peran pentingnya pada tahap awal dan akhir infeksi KSHV.Dalam penelitian ini, kami mensurvei interaksi ORF45 menggunakan panel antibodi monoklonal.Selain protein kinase teregulasi ekstraseluler (ERK) dan p90 ribosom S6 kinase (RSK) yang diidentifikasi sebelumnya, kami menemukan beberapa protein kopurifikasi lainnya, termasuk yang menonjol dari ∼38 kDa dan ∼130 kDa.Spektrometri massa mengungkapkan bahwa protein 38-kDa adalah ORF33 virus dan protein 130-kDa adalah USP7 seluler (protease 7 ubiquitin-spesifik).Kami memetakan domain pengikat ORF33 ke asam amino 19 terminal karboksil yang sangat terkonservasi (aa) dari ORF45 dan domain pengikat USP7 ke motif konsensus yang dilaporkan di wilayah tengah ORF45.Menggunakan pewarnaan imunofluoresensi, kami mengamati kolokalisasi ORF45 dengan ORF33 atau USP7 baik dalam kondisi ion yang ditransfusikan maupun dalam sel yang terinfeksi KSHV.Selain itu, kami melihat relokasi sebagian ORF33 / USP7 yang bergantung pada ORF45 dari nukleus ke sitoplasma.Kami menemukan bahwa ORF45 menyebabkan peningkatan akumulasi protein ORF33 yang dihapuskan jika domain pengikat ORF33- atau USP7 di ORF45 dihapus.Selanjutnya, penghapusan terminal karboksil ORF45 yang dilestarikan dalam genom KSHV secara drastis mengurangi tingkat protein ORF33 dalam sel yang terinfeksi KSHV dan menghapuskan produksi virion progeni.Secara kolektif, hasil kami tidak hanya mengungkapkan komponen baru dari interaksi ORF45, tetapi juga menunjukkan bahwa interaksi di antara protein ini sangat penting untuk replikasi litik KSHV. Virus herpes terkait sarkoma Kaposi (KSHV) adalah agen penyebab beberapa kanker manusia.KSHV ORF45 adalah protein multifungsi yang diperlukan untuk replikasi litik KSHV, tetapi mekanisme yang tepat dimana ORF45 melakukan fungsi kritisnya tidak jelas.Studi kami sebelumnya mengungkapkan bahwa semua pr otein ORF45 dalam sel ada di kompleks dengan berat molekul tinggi.Oleh karena itu kami berusaha untuk mengkarakterisasi interaksi ORF45 untuk memberikan wawasan tentang perannya selama replikasi litik.Menggunakan panel antibodi monoklonal, kami mensurvei interaksi ORF45 dalam sel yang terinfeksi KSHV.Kami mengidentifikasi dua mitra pengikat baru ORF45: protein virus ORF33 dan protease spesifik ubiquitin seluler 7 (USP7).Kami selanjutnya menunjukkan bahwa interaksi antara ORF45 dan ORF33 sangat penting untuk produksi partikel virus KSHV yang efisien, menunjukkan bahwa gangguan yang ditargetkan dengan interaksi ini dapat mewakili strategi baru untuk menghambat replikasi litik KSHV.