Produk

Monogalactopyranosides of fluorescein dan fluorescein methyl ester: sintesis, hidrolisis enzimatik dengan biotnylated β-galactosidase, dan penentuan koefisien difusi translasi

Fluorescein monoglikosida (d-galactopyranoside (FMG) dan d-glucopyranoside) dan metil ester (MFMG) telah dibuat dari acetobromoglucose/galaktosa dan fluorescein metil ester dengan hasil yang baik.Eksperimen hidrolisis enzimatik (menggunakan β-galactosidase terbiotinilasi) dari turunan galakto telah dilakukan dan parameter kinetik dihitung.Peningkatan intensitas fluoresensi 15-20 kali telah diamati selama hidrolisis.Peningkatan linier fluoresensi telah dicatat dalam waktu singkat dan konsentrasi substrat yang rendah, membuat senyawa ini berguna dan sensitif terhadap galaktosidase.Besarnya nilai konstanta Michaelis–Menten (Km) untuk MFMG lebih tinggi daripada FMG yang menunjukkan kemungkinan perubahan konformasi substrat fluorogenik.Nilai Km untuk β-Gal terbiotinilasi dengan FMG lebih rendah dibandingkan dengan enzim asli.Pengamatan ini menunjukkan afinitas substrat yang lebih tinggi dari enzim biotinilasi dibandingkan dengan enzim asli.Koefisien difusi translasi telah diukur, untuk substrat fluorogenik dan kedua produk, menggunakan spektroskopi korelasi fluoresensi.Koefisien difusi translasi untuk substrat fluorogenik dan produk hidrolisis enzimatik telah diukur serupa, dalam kisaran 3,5–4,5 × 10−10 m2 s−1.Dengan demikian peningkatan atau keterlambatan kinetika enzimatik karena perbedaan mobilitas translasi substrat dan produk tidak begitu terlihat.