Produk

Fosforilasi protein mengatur beragam fungsi seluler dan memainkan peran kunci dalam perkembangan awal tanaman.Untuk melengkapi dan memperluas penyelidikan sebelumnya tentang fosforilasi protein pada bibit Arabidopsis, kami menggunakan pendekatan alternatif yang menggabungkan ekstraksi protein dalam kondisi non-denaturasi dengan pengayaan kromatografi afinitas logam-ion (IMAC) amobil dari fosfoprotein utuh dalam ekstrak yang habis Rubisco, diikuti dengan identifikasi menggunakan elektroforesis gel dua dimensi (2-DE) dan kromatografi cair-spektrometri massa tandem (LC-MS/MS).Pencernaan trypsin dalam gel dan analisis bintik-bintik gel terpilih mengidentifikasi 144 peptida dan residu terfosforilasi, di mana hanya 18 fosfopeptida dan 8 fosfosit yang ditemukan di database situs fosforilasi PhosPhAt 4.0 dan P3DB Arabidopsis thaliana.Lebih dari separuh dari 82 fosfoprotein yang teridentifikasi terlibat dalam metabolisme karbohidrat, fotosintesis/respirasi, atau mekanisme respons stres oksidatif.Pengayaan fosfoprotein utuh sebelum 2-DE dan LC-MS/MS tampaknya meningkatkan deteksi residu treonin dan tirosin terfosforilasi dibandingkan dengan metode yang menggunakan pengayaan tingkat peptida, menunjukkan bahwa kedua pendekatan tersebut agak saling melengkapi dalam hal cakupan situs fosforilasi.Membandingkan hasil untuk bibit muda dengan yang diperoleh sebelumnya untuk daun Arabidopsis dewasa mengidentifikasi lima protein yang terfosforilasi secara berbeda dalam jaringan ini, menunjukkan potensi teknik ini untuk menyelidiki dinamika fosforilasi protein selama pengembangan tanaman.