Produk

Untuk secara khusus mengukur beberapa metabolit 5-fluorouracil (5-FU) dan dua nukleotida monofosfat endogen, kami mengembangkan metode asli berdasarkan kromatografi cair-spektrometri massa tandem (LC-MS/MS).Pengujian ini memungkinkan penentuan: (i) produksi intraseluler 5-fluoro-2′-deoxyuridine-5′-monophosphate (5-FdUMP) dari 5-FU atau 5-fluoro-2′-deoxyuridine (5-FdUrd) , (ii) dampak konsentrasi 5-FdUMP pada rasio 2′-deoxyuridine-5′-monophosphate (dUMP) / thymidine-5′-monophosphate (TMP) intraseluler, dan (iii) tingkat sekresi 5-FdUMP dan 5-FU dari sel kultur manusia oleh transporter ABC.Dalam kondisi eksperimental kami, sel diinkubasi dengan 5-FU atau 5-FUrd.Kemudian, protein seluler diendapkan oleh metanol.Prosedur ini memberikan pemulihan ekstraksi yang tinggi.Selain itu, untuk mengukur sekresi 5-FU dan 5-FdUMP dari sel, kami melakukan kuantifikasi molekul-molekul ini dalam media kultur.Media disuntikkan langsung (5-FU) atau menjalani ekstraksi fase padat menggunakan kartrid ekstraksi Oasis Wax (5-FdUMP).Pemisahan analit dilakukan pada kolom dC18 Atlantis 3,5 μm, (100 mm × 2,1 mm id) dengan mode isokratik menggunakan buffer amonium format/metanol/air (5/5/90, v/v) sebagai fase gerak.Waktu berjalan tidak melebihi 6,2 menit.Analit diionisasi dalam antarmuka elektrospray dalam mode ion negatif.Kami memvalidasi metode pada kisaran 2,5–150 ng mL −1 menurut senyawanya.Variabilitas intra dan antar pengujian lebih rendah dari 10% selama tujuh hari.Semua senyawa stabil dalam sel atau media kultur ketika sampel disimpan pada suhu -20 °C selama setidaknya dua minggu, dan setelah tiga siklus pencairan beku.Tidak ada efek matriks yang diamati di kedua media.