Produk

LecA (PA-IL) adalah lektin dan adhesin sitotoksik yang diproduksi oleh Pseudomonas aeruginosa yang mengikat galaktosida hidrofobik dengan spesifisitas dan afinitas tinggi.Dengan menggunakan fusi terjemahan lecA-egfp dan analisis imunoblot dari matriks ekstraseluler biofilm, kami menunjukkan bahwa lecA diekspresikan dalam sel yang ditumbuhkan biofilm.Dalam uji biofilm statis pada polistiren dan baja tahan karat, kedalaman biofilm dan cakupan permukaan dikurangi dengan mutasi lecA dan ditingkatkan dalam galur penghasil LecA PAO-P47 yang berlebihan.Cakupan permukaan biofilm oleh strain induk, PAO-P47 tetapi bukan mutan lecA pada kupon baja juga dihambat oleh pertumbuhan dengan adanya isopropil-beta-D-thiogalactoside (IPTG) atau p-nitrophenyl-alpha-D-galactoside ( NPG).Selanjutnya, biofilm tipe liar dewasa yang terbentuk tanpa adanya galaktosida hidrofobik ini dapat didispersikan dengan penambahan IPTG.Sebaliknya, penambahan p-nitrophenyl-alpha-L-fucose (NPF) yang memiliki afinitas tinggi terhadap lektin P. aeruginosa LecB (PA-IIL) tidak berpengaruh pada pembentukan atau penyebaran biofilm.Pertumbuhan planktonik P. aeruginosa PAO1 tidak terpengaruh oleh keberadaan IPTG, NPG atau NPF, juga strain tidak dapat memanfaatkan gula ini sebagai sumber karbon, menunjukkan bahwa efek yang diamati pada pembentukan biofilm disebabkan oleh penghambatan kompetitif ligan LecA. mengikat.Hasil serupa juga diperoleh untuk biofilm yang ditanam di bawah kondisi aliran dinamis pada kupon baja, menunjukkan bahwa LecA berkontribusi pada arsitektur biofilm P. aeruginosa di bawah kondisi lingkungan yang berbeda.

Sebuah alpha-L-fucosidase (EC 3.2.1.51) mampu melepaskan residu t-fucosyl dari rantai samping oligosakarida xyloglucan telah terdeteksi pada daun tanaman Arabidopsis.Selain itu, alfa-L-fucosidase dengan spesifisitas substrat serupa dimurnikan dari daun kubis (Brassica oleracea) untuk membuat satu pita pada SDS-PAGE.Dua urutan peptida diperoleh dari pita protein ini, dan mereka digunakan untuk mengidentifikasi pengkodean gen Arabidopsis untuk alfa-fucosidase yang kami usulkan untuk disebut AtFXG1.Selain itu, gen Arabidopsis dengan homologi dengan alfa-L-fucosidase yang diketahui juga telah ditemukan, dan kami mengusulkan untuk menamainya sebagai AtFUC1.Baik AtFXG1 dan ATFUC1 secara heterolog diekspresikan dalam sel Pichia pastoris dan aktivitas alfa-L-fucosidase disekresikan ke media kultur.Alpha-L-fucosidase yang dikodekan oleh AtFXG1 aktif melawan oligosakarida dari xyloglucan XXFG serta melawan 2'-fucosyl-lactitol tetapi tidak melawan p-nitrophenyl-alpha-L-fucopyranoside.Namun, AtFUC1 yang diekspresikan secara heterolog hanya aktif terhadap 2'-fucosyl-lactitol.Dengan demikian, yang pertama harus terkait dengan metabolisme xyloglucan.