Ada banyak pahlawan tanpa tanda jasa di sekitar kita, yang terlihat biasa saja, namun nyatanya diam-diam mereka banyak berkontribusi bagi kita.Proteinase K adalah "pahlawan tanpa tanda jasa" dalam industri diagnostik molekuler, meskipun dibandingkan dengan "besar dan kuat" dalam industri ini, proteinase K sangat rendah sehingga kita telah lama mengabaikan pentingnya.Dengan merebaknya epidemi tajuk baru, permintaan proteinase K melonjak, dan pasokan di dalam dan luar negeri jauh di bawah konsumsi, dan semua orang tiba-tiba menyadari bahwa proteinase K sangat penting.
Apa gunanya proteinase K?
Proteinase K adalah protease serin dengan aktivitas enzim proteolitik dan dapat mempertahankan aktivitas di berbagai lingkungan (pH (4-12,5), buffer garam tinggi, suhu tinggi 70°C, dll.).Selain itu, aktivitas proteinase K tidak dihambat oleh SDS, urea, EDTA, guanidine hydrochloride, guanidine isothiocyanate, dll., Dan sejumlah detergen juga dapat meningkatkan aktivitas proteinase K. Dalam perawatan medis (disinfeksi virus dan mikroba ), makanan (pelembutan daging), kulit (pelembutan rambut), pembuatan anggur (penjernihan alkohol), preparasi asam amino (penurunan bulu), ekstraksi asam nukleat, hibridisasi in situ, dll., proteinase K Ada aplikasinya.Aplikasi yang paling umum digunakan adalah ekstraksi asam nukleat.
Proteinase K dapat mengenzimolisis semua jenis protein dalam sampel, termasuk histon yang terikat erat dengan asam nukleat, sehingga asam nukleat dapat dilepaskan dari sampel dan dilepaskan ke ekstrak, memfasilitasi langkah ekstraksi dan pemurnian selanjutnya.Dalam deteksi asam nukleat virus, proteinase K merupakan salah satu komponen penting dalam larutan pengambilan sampel virus.Proteinase K dapat memecahkan dan menonaktifkan protein selubung virus, yang lebih aman selama tahap transportasi dan deteksi;selain itu, proteinase K juga dapat mendegradasi RNase mencegah degradasi RNA virus dan memfasilitasi deteksi asam nukleat.
Ketenaran semalam proteinase K
Baik di bidang penelitian ilmiah maupun di bidang IVD, ekstraksi asam nukleat adalah eksperimen paling dasar, sehingga proteinase K selalu menjadi keberadaan yang sangat penting.Namun, di masa lalu, proteinase K kurang dikenal dibandingkan perannya.Sebagian besar karena hubungan penawaran dan permintaan proteinase K sangat stabil.Hanya sedikit orang yang berpikir bahwa suplai proteinase K akan menjadi masalah.
Dengan merebaknya epidemi mahkota baru, permintaan untuk pengujian asam nukleat telah melonjak.Hingga akhir Juni 2020, China telah menyelesaikan hampir 90 juta tes mahkota baru, dan angka ini bahkan lebih mengkhawatirkan dalam skala global.Dalam percobaan ekstraksi asam nukleat, konsentrasi kerja proteinase K adalah sekitar 50-200 μg/mL.Umumnya, dibutuhkan sekitar 100 μg proteinase K untuk mengekstrak sampel asam nukleat.Dalam penggunaan sebenarnya, untuk meningkatkan efisiensi ekstraksi asam nukleat, seringkali Proteinase K akan digunakan dalam jumlah yang meningkat.Deteksi asam nukleat dari virus corona baru telah membawa permintaan proteinase K dalam jumlah besar.Keseimbangan pasokan dan permintaan asli dari proteinase K dengan cepat rusak, dan proteinase K menjadi bahan pencegahan epidemi yang penting dalam semalam.
Kesulitan dalam produksi proteinase K
Meskipun dengan perkembangan epidemi, nilai penting dari proteinase K telah dihargai oleh orang-orang, sangat memalukan bahwa karena terlalu rendahnya proteinase K, hanya sedikit perusahaan domestik yang terlibat dalam produksi proteinase K. Ketika orang ingin membangun produksi proteinase K Selama proses produksi, ditemukan bahwa proteinase K adalah protein yang sangat istimewa.Sangat menantang untuk memperluas kapasitas produksi proteinase K dalam waktu singkat.
Produksi proteinase K skala besar menghadapi kesulitan-kesulitan berikut
1. Ekspresi rendah
Proteinase K dapat mendegradasi sebagian besar protein secara tidak spesifik dan menyebabkan toksisitas serius pada ekspresi sel inang.Oleh karena itu, tingkat ekspresi proteinase K umumnya sangat rendah.Skrining sistem ekspresi dan galur yang sangat mengekspresikan proteinase K umumnya membutuhkan siklus yang lebih lama.
2. Residu pigmen dan asam nukleat
Fermentasi skala besar memperkenalkan sejumlah besar pigmen dan residu asam nukleat inang.Sulit untuk menghilangkan kotoran ini dengan proses pemurnian sederhana, dan pemurnian kompleks meningkatkan biaya dan mengurangi tingkat pemulihan.
3. Ketidakstabilan
Proteinase K tidak cukup stabil, ia dapat mengenzimkan dirinya sendiri, dan sulit untuk menyimpannya secara stabil pada suhu 37°C untuk waktu yang lama tanpa zat pelindung.
4. Mudah mengendap
Saat menyiapkan bubuk kering-beku proteinase K, untuk memastikan bahwa kandungan padat proteinase K dalam bubuk kering-beku besar, perlu menambahkan zat pelindung kering-beku pada konsentrasi tinggi, tetapi bila konsentrasi proteinase K mencapai 20mg/mL ke atas, mudah Agregasi membentuk endapan, yang membawa kesulitan besar pada pengeringan beku proteinase K dengan kandungan padat yang tinggi.
5. Investasi besar
Proteinase K memiliki aktivitas protease yang kuat dan dapat menghidrolisis protease lain di laboratorium.Oleh karena itu, proteinase K memerlukan area produksi khusus, peralatan, dan personel untuk penelitian dan pengembangan serta produksi.
Larutan proteinase K XD BIOCHEM
XD BIOCHEM has a mature protein expression and purification platform, and has rich experience in the expression and purification of recombinant proteins and optimization of production processes. Through the rapid formation of a research and development team, the large-scale production process of proteinase K has been overcome. The monthly output of freeze-dried powder is more than 30 KG. The product has stable performance, high enzyme specific activity, and no host cytochrome and nucleic acid residues. Welcome to contact XD BIOCHEM Obtain a trial package (E-mail: sales@xdbiochem.com Tel: +86 513 81163739).
Solusi teknis XD BIOCHEM meliputi
Menggunakan integrasi plasmid multi-salinan, galur berekspresi tinggi dengan tingkat ekspresi 8g/L dipilih, yang mengatasi masalah rendahnya tingkat ekspresi proteinase K;
Melalui pembentukan proses pemurnian multi-langkah, sitokrom inang dan residu asam nukleat dari proteinase K berhasil dihilangkan di bawah nilai standar;
Melalui skrining throughput tinggi dari formulasi buffer pelindung, buffer yang dapat menyimpan proteinase K secara stabil pada suhu 37°C dipilih;
Penyaringan buffer mengatasi masalah bahwa proteinase K mudah diagregasi dan diendapkan pada konsentrasi tinggi, dan meletakkan dasar untuk pengeringan beku kandungan padat proteinase K yang tinggi.
Sampel XD BIOCHEM proteinase K
Uji stabilitas XD BIOCHEM proteinase K: tidak akan ada perubahan aktivitas yang signifikan setelah 80 hari pada suhu kamar
Uji stabilitas XD BIOCHEM proteinase K: tidak akan ada perubahan aktivitas yang signifikan setelah 80 hari pada suhu kamar
Perbandingan efek ekstraksi asam nukleat dari XD BIOCHEM proteinase K dan produk pesaing.Dalam proses ekstraksi asam nukleat, XD BIOCHEM dan proteinase K kompetitif digunakan masing-masing.Efisiensi ekstraksi XD BIOCHEM proteinase K lebih tinggi dan nilai Ct gen target lebih rendah.
Waktu posting: Des-31-2021