Produk

Mirip dengan virus RNA untai positif lainnya, virus tombus direplikasi oleh kompleks replikase virus (VRC) yang terikat membran.VRC terdiri dari p92 virus-coded RNA-dependent RNA polymerase (RdRp), pendamping RNA p33 virus, dan beberapa protein inang yang terkooptasi.Untuk menjadi RdRp fungsional setelah diterjemahkan, protein replikasi p92 harus dimasukkan ke dalam VRC, diikuti dengan aktivasi.Kami sebelumnya telah menunjukkan dalam pengujian berbasis ekstrak ragi bebas sel bahwa aktivasi RdRp (TBSV) RdRp membutuhkan faktor inang yang dapat larut.Pada artikel ini, kami mengidentifikasi protein kejut panas seluler 70 (Hsp70) sebagai faktor inang terkooptasi yang diperlukan untuk aktivasi TBSV RdRp rekombinan terpotong N-terminal.Selain itu, pemblokiran fungsi Hsp70 berbasis molekul kecil menghambat sintesis RNA oleh virus tombus RdRp in vitro.Selanjutnya, kami menunjukkan bahwa fosfolipid netral, yaitu fosfatidiletanolamin (PE) dan fosfatidilkolin (PC ), meningkatkan aktivasi RdRp secara in vitro.Sebaliknya, fosfatidilgliserol (PG) menunjukkan efek penghambatan yang kuat dan dominan pada aktivasi RdRp in vitro.Kami juga menunjukkan bahwa PE dan PC menstimulasi interaksi RdRp-viral plus-strand RNA [(+)RNA], sementara PG menghambat pengikatan RNA virus ke RdRp.Berdasarkan peran stimulasi versus penghambatan berbagai fosfolipid dalam aktivasi RdRp virus tombus, kami mengusulkan bahwa komposisi lipid dari membran subselular yang ditargetkan dapat digunakan oleh virus tombus untuk mengatur perakitan VRC baru selama infeksi. RNA polimerase yang bergantung pada RNA berkode virus (RdRp), yang bertanggung jawab untuk mensintesis progeni RNA virus dalam sel yang terinfeksi dari beberapa virus RNA untai positif, pada awalnya tidak aktif.Strategi ini kemungkinan untuk menghindari sintesis RNA virus dalam sitosol yang akan dengan cepat mengarah pada induksi respons antivirus seluler yang dipicu oleh RNA.Selama perakitan kompleks replikase yang terikat membran, RdRp virus menjadi aktif melalui proses yang tidak sepenuhnya dipahami yang membuat RdRp mampu mensintesis RNA.Dengan menggunakan TBSV RdRp, kami menunjukkan bahwa pendamping Hsp70 seluler terkooptasi dan fosfolipid netral memfasilitasi aktivasi RdRp secara in vitro.Sebaliknya, fosfatidilgliserol (PG) memiliki efek penghambatan dominan pada aktivasi RdRp in vitro dan interaksi RdRp-RNA virus, menunjukkan bahwa mikrodomain membran yang mengelilingi RdRp sangat memengaruhi kemampuannya untuk sintesis RNA.Dengan demikian, aktivasi virus RdRp kemungkinan bergantung pada banyak komponen inang dalam sel yang terinfeksi.